Таким образом, из-за того, что наиболее эффективное ингибирование кальпаинов с кальпастатином требует участия всех субдоменов кальпастатина - А, В и С, то, возможно, что все три субдомена должны связываться с кальпаином для максимального ингибирования (Kawasaki et al., 1989).
Многообразие эффектов Са2+-зависимых нейтральных протеиназ обеспечивается активацией ряда ключевых ферментов обмена, рецепторов, а также расщеплением разнообразных белков (миофибриллярных, мембранных белков, цитоскелета). Особенности действия и субклеточная локализация этих протеиназ в местах клеточно-матриксных контактов предполагают определенные взаимоотношения кальпаин-кальпастатиновой системы и компонентов внеклеточного матрикса (Строев и др., 1997).
Карбоксипептидаза М (КП М, КФ 3.4.17.2) была обнаружена Skidgel и соавторами в цитоплазматических мембранах периферических тканей и мозга (Skidgel et al., 1984).
Фермент широко распространен в человеческой плаценте, почках, легких (Skidgel et al., 1991), периферических нервах, головном мозге (Nagae et al., 1992), желтом теле, гранулярных клетках растущих и незрелых фолликулов (Yoshioka S. et al., 1998), эндотелиальных клетках кровеносных сосудов, лейкоцитах (De Saint-Vis et al., 1995), Активность карбоксипептидазы М в нервной ткани на порядок ниже, чем в плаценте, а в периферических нервах выше, чем в головном мозге. В мозге фермент обнаружен в клетках глиии, а также в комплексе с миелином и миелинформирующими клетками (Nagae et al., 1992).
КП М является гликопротеином с Mr 62000 (Deddish et al., 1990, Skidgel et al., 1986). Фермент представлен одной полипептидной цепью и связан с плазматической мембраной при помощи остатка гликозил-фосфатидилинозитола (Deddish et al., 1990, Skidgel et al., 1986). При воздействии трипсина и фосфолипазы С КП М переходит в растворимую форму за счет удаления остатка гликозил-фосфатидилинозитола (Deddish et al., 1990, Skidgel et al., 1996). Этот процесс возможен и in vivo, так как фермент обнаружен в моче и амниотической жидкости (Skidgel et al., 1996). При химическом дегликозилировании образуется полипептид с Mr 48000, который состоит из 439 аминокислотных остатков (Skidgel et al., 1991).
Максимальная активность КП М отмечается при рН 7,0. В активном центре фермента находится ион Zn2+ (Skidgel et al., 1986). Ионы Со2+ повышают активность КП М в 1,5 - 2 раза, причем степень активации возрастает при снижении рН. Действие фермента ингибируется ионами Cd2+, о-фенантролином, 2-меркаптометил-3-гуанидилэтилтиопропановой кислотой (Deddish et al., 1990).
КП М отщепляет остатки только основных аминокислот, причем в отсутствие ионов Со2+ предпочтительней отщепляет аргинин, а в присутствии Со2+ - лизин. Фермент в большей степени проявляет эстеразную активность, чем пептидазную (Deddish et al., 1990, Skidgel et al., 1986). In vitro КП М отщепляет остатки аргинина и лизина с С-конца Met5-энкефалин-Arg6, Met-энкефалин-Lys6, Leu5-энкефалин-Arg6, брадикинина, динорфина А1-13 (Skidgel et al., 1986), фактора роста эпидермиса (Skidgel et al., 1996), анафилотоксинов С3а, С4а и С5а, различных синтетических пептидов (Deddish et al., 1990, Skidgel et al., 1984).
Считают, что карбоксипептидаза М участвует в инактивации или модулировании активности пептидных гормонов до или после их взаимодействия с рецепторами, вовлекается в процессы клеточного роста и дифференциации. В связи с этим представляет интерес изучение активности КП М при введении галоперидола и диазепама.
Каспазы (КФ 3.4.22) - это внутриклеточные пептидгидролазы, имеющие активированный цистеин внутри высококонсервативного активного сайта, включающего пентапептид QACXG, который определяет связывание пептидного субстрата и его гидролиз после остатка аспарагиновой кислоты. В настоящее время все известные каспазы пронумерованы согласно времени их открытия (Мартынова, 2003).
TimeBiology