Экспериментальная часть

Среда Гетчинсона (г/л): NaNO3 - 2,5; FeCl3 - 0,01; K2HPO4 - 1; MgSO4*7H2O - 0,3; NaCl - 0,1; CaCl2 - 0,1; pH среды доводят до 7,2, добавлением 20% - го раствора Na2CO3; дистиллированная вода; МПА.

.2 Ход работы

Субстрат: КОРОЕД.

1. Исследуемые короеды растираем в ступке пестиком со стерильным песком, затем добавляем дистиллированной воды, размешиваем до образования однородной массы. И делаем посев на жидкую среду Гетчинсона в три колбы на 250 мл. Питательной средой является фильтровальная бумага, сложенная в форме конуса. Опускаем бумагу в колбу конусом вниз. Далее ставим в термостат при 37 0С .

2. После того как начнется разложение фильтровальной бумаги микроскопируем, для того чтобы определить какие выросли микроорганизмы.

. Чтобы выделить чистую культуру микроорганизмов, делаем пересев на плотную среду Гетчинсона с МПА с помощью поверхностного посева из накопительной культуры. В качестве питательной среды - полоски фильтровальной бумаги. Затем ставим в термостат при 37 0С.

. О получении чистой культуры судят по выявлению характерных признаков развития выделяемых микроорганизмов. Помимо визуального наблюдения накопительную культуру микроскопируют и выявляют присутствие желаемых форм, или продуктов метаболизма, образование которых свойственно выделяемым микроорганизмам.

. Выявление каталазы. Проводят на предметном стекле в капле 5% перекиси водорода. Стерильной бактериологической петлей вносят исследуемую культуру и тщательно перемешивают. При наличии каталазы происходит разложение перекиси водорода с выделением пузырьков кислорода.

. Изучение морфолого-физиологических свойств:

a) Изучение усвоения углеводов. Посев на среду Гисса.

b) Проба на аммиак: Процессы разложения азотсодержащих соединений с выделением аммиака называются аммонификацией. Аммонификация имеет важное значение для питания растения, круговорота азота в природе. Процесс этот осуществляется бактериями в аэробных и анаэробных условиях. Выделяющийся в атмосферу аммиак окрашивает подвешенную влажную красную лакмусовую бумагу в синий цвет.) Проба на сероводород: Полоску фильтров бумаги пропитывают раствором уксуснокислого свинца, высушивают и помещают в пробирку, укрепив ватной пробкой. В присутствии сероводорода полоска бумаги через несколько дней чернеет. Образование на поверхности почерневшей бумаги серебристого налета свидетельствуют о выделении и других соединений среды (меркаптанов). При введении в состав питательной среды лимоннокислого или виннокислого железа выделение сероводорода ведет к почернению всей среды.

7. Выявление антагонистической активности:. Проба на антибиотики: В чашку Петри разливаем среду Гетчинсона с МПА, предварительно приготовим разведение с антибиотиками. Бензилпенициллин разводим 1:10 физ. раствором. В приготовленном растворе пропитываем кружки фильтровальной бумаги антибиотиком. Чистую культуру целлюлозолитических микроорганизмов добавляем в чашку Петри и зигзагообразными движениями проводим на среде вертикально и горизонтально. Затем берем кружок фильтровальной бумаги и помещаем в чашку Петри. Ставим в термостат при 37 0С.

b. Проба с E. Colli: В чашку Петри с подсушенной средой Гетчинсона с МПА вносят точно измеренный объем (0,05 или 0,1 мл) соответствующего разведения целлюлозолитических микроорганизмов и распределяют его стеклянным шпателем по поверхности среды. Затем распределяем E. Colli вертикальными и горизонтальными линиями в форме сетки. Ставим в термостат при 370С.

.3 Результаты

По выявлению характерных признаков развития выделяемых микроорганизмов - помутнение среды, появление пигментации, разложение фильтровальной бумаги можем сделать вывод, что присутствуют целлюлозолитические микроорганизмы. Помимо визуального наблюдения микроскопируют и выявляют присутствие желаемых форм, или продуктов метаболизма, образование которых свойственно выделяемым микроорганизмам. Результаты микроскопирования целлюлозолитических бактерий на рис. 1.

Форма бактерий палочковидная, они располагаются одиночно, парами или короткими цепочками, клетки неподвижны, форма концов клетки заостренная относятся к миксобактериям (подпорядок Cystobacterinae). Определенное расположение клеток относительно друг друга обусловлено направлением деления и прочностью связи между разделившимися клетками. Окраска по Грамму показала, что бактерии грамположительные, так как приобрели сине-фиолетовое окрашивание. Размеры бактерий 2 мкм.