Приведенные выше планы Бута и Кокса эффективны и при выяснении питательных потребностей ауксотрофов после мутагенеза некого штамма с известными питательными потребностями, отбора и характеристике полученных мутантов. Причем для этого случая названные планы более оптимальны, чем для случая поиска регуляторных факторов у неизученного штамма. После мутагенеза, как правило, новые потребности в витаминах или аминокислотах связаны с одним фактором роста, множественные мутации редки, работа проводится с объектом, физиология которого хорошо изучена. При работе с новым, плохо изученным продуцентом задача гораздо сложнее.
Нахождение известных компонент питательной среды, влияющих на синтез целевого продукта, дает хорошую основу для генетической модификации продуцента. Знание основных регуляторных факторов служит основой для селекции конститутивных мутантов после индуцированного мутагенеза исходного штамма. Это в принципе дает возможность применять дешевые компоненты питательных сред, минимально охарактеризованные по составу.
Возможен и другой путь - синтез аналогов регуляторных факторов, которые доставляют в клетки нужные питательные вещества, не реагируя с опероном синтеза целевого продукта. Такие работы проводили с большим количеством штаммов разные авторы и их конкретные результаты мало что дают при изучении нового объекта.
Для проведения поиска факторов, влияющих на синтез целевого продукта, можно выбрать план, представленный в таблице 4. В отличие от обозначений факторов двухуровневых планов, принятых в литературе /1,4/ в виде (+/-), введена нумерация каждого фактора на верхнем уровне и отсутствие обозначений для нижнего уровня. Номер столбца соответствует новому фактору.
Таблица 6
План разработанного отсеивающего эксперимента
|
№ э\ф |
1 |
2 |
3 |
4 |
1-2 |
1-3 |
1-4 |
2-3 |
2-4 |
3-4 |
3-5 |
4-5 |
4-6 |
4-8 |
7-8 |
|
1 |
1 | | |
4 | | |
7 |
8 | | |
11 | | |
14 |
15 |
|
2 |
1 | | | | | | |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
13 | | |
|
3 |
1 | |
3 |
4 | |
6 |
7 | | |
10 | | |
13 | | |
|
4 |
1 | |
3 | | |
6 | | |
9 | | |
12 | |
14 |
15 |
|
5 |
1 |
2 | |
4 |
5 | |
7 | |
9 | | |
12 | | | |
|
6 |
1 |
2 | | |
5 | | | | |
10 | | |
13 |
14 |
15 |
|
7 |
1 |
2 |
3 | |
5 |
6 | |
8 | | |
11 | | | | |
|
8 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
13 |
14 |
15 |
|
9 | |
2 |
3 |
4 | | | |
8 |
9 |
10 | | | |
14 | |
|
10 | |
2 |
3 | | | |
7 |
8 | | | |
12 |
13 | |
15 |
|
11 | |
2 | |
4 | |
6 | | |
9 | |
11 | |
13 | |
15 |
|
12 | |
2 | | | |
6 |
7 | | |
10 |
11 |
12 | |
14 | |
|
13 | | |
3 |
4 |
5 | | | | |
10 |
11 |
12 | | |
15 |
|
14 | | |
3 | |
5 | |
7 | |
9 | |
11 | |
13 |
14 | |
|
15 | | | |
4 |
5 |
6 | |
8 | | | |
12 |
13 |
14 | |
|
16 | | | | |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 | | | | |
15 |
TimeBiology