Отсеивающий эксперимент

Для хемоорганотрофов нужны соединения азота в виде аминокислот и коротких пептидов, остающихся в растворимом виде после автоклавирования (пептоны) /16/. Возможно позитивное влияние и биогенных аминов (аспарагин, глутамин и т.д.). В большинстве случаев можно ограничиться только набором наиболее распространенных индивидуальных 20ти, хотя в некоторых случаях пептиды могут быть регуляторными факторами при синтезе конкретного ЦП. Аминокислоты могут требоваться не все, наиболее часто применяемые 20, а лишь некоторые. Для этого необходимо поставить многофакторный активный отсеивающий эксперимент и выбрать минимальную группу аминокислот, обеспечивающих нужный ВП.

При этом наиболее логично фиксировать макро и микро элементы и источник витаминов, в большинстве случаев, дрожжевой экстракт в разбавленном виде, чтобы уменьшить вклад аминокислот. Иногда применяют какой - ни будь поливитаминный комплекс медицинского или ветеринарного назначения, стерилизованный фильтрованием. Это более подходящий вариант, поскольку не содержит собственных аминокислот и пептидов, шире по содержанию витаминов, а возможные углеводы и прочие добавки можно учесть, либо значительно уменьшить их влияние разбавлением.

Поиск минимальной группы необходимых аминокислот можно делать, ставя ОЭ по методу случайного баланса на основе сверхнасыщенного плана Бута и Кокса (число проверяемых факторов больше количества испытаний в серии экспериментов) таб.1 /цит. по 1/. Названная серия испытаний позволяет проверить 20 наиболее часто встречающихся незаменимых аминокислот на 12ти экспериментальных точках. Для этого делают различные групповые выборки аминокислот из общего числа, по близкому к оптимальному плану, который проще всего отобразить в виде таблицы.

Единственность плана таб.1 не доказана, возможны импровизации. План близок к оптимальному, поскольку практически все теоретически возможные парные сочетания факторов учтены с равными частотами (большинство вектор - столбцов ортогональны). Но это в литературе не указано /1/. Согласно личному опыту, поисковые многофакторные планы на основе серии экспериментов достаточно устойчивы к небольшим промахам типа пропущенной или лишней добавки, в какую-либо проверяемую комбинацию.

Если хотя бы в одном опыте из серии экспериментов ВП достоверно отличен от 0, то задачу отсеивания можно считать решенной, поскольку найдена активная комбинация факторов среди весьма большого количества первоначально выбранных подозреваемых.

Таблица 1

План ОЭ “первого шага” Бута и Кокса для поиска минимальной группы необходимых аминокислот /1/