Температурная зависимость активности нейтральных протеаз печени сусликов при зимней спячке и в ходе индуцированного пробуждения

Рис. 17. Температурная зависимость активности нейтральных протеаз печени бодрствующих сусликов.

Рис. 18. Температурная зависимость активности нейтральных протеаз печени сусликов в динамике зимней спячки.

Сравнение Аррениусовских кривых нейтральных протеаз в печени крыс при глубокой спячке выявило, что независимо от длительности гибернации (1 и 2 месяца) наблюдается излом при 20ºС, а энергии активации выше и ниже точки излома меняются и соответственно равны: после 1-го месяца спячки: 21 и 28.7 кДж/моль, а после 2-го месяца спячки: 66.9 и 34.4 кДж/моль.

К концу 3-го месяца спячки температурная зависимость активности нейтральных протеаз печени суслика представлена прямой с Еа= 32.5 кДж/моль.

Обращает на себя внимание тот факт, что энергия активации после 2го месяца спячки увеличивается как выше, так и ниже точки «перелома», что свидетельствует об увеличении температурной зависимости фермента.

После 2-ого месяца мы исследовали активности нейтральных протеаз печени суслика на этапах самосогревания после индуцированного пробуждени.

Температурная зависимость общей активности нейтральных протеаз, выраженная в Аррениусовских координатах, при температуре тела 10ºС имеет излом при 30ºС: Еа выше точки излома составляет 23.9 кДж/моль, ниже - 86 кДж/моль (рис. 19).

При повышении температуры тела суслика до 25ºС точка излома соответствует 20ºС. При этом выше точки излома Еа=21 кДж/моль, ниже - 84 кДж/моль (рис. 21).

Графики температурной зависимости активности нейтральных протеаз при температуре тела животного 20ºС, 30ºС и 37ºС имеют прямую с энергией активации 44, 59.3 и 38.2 кДж/моль, соответственно (рис. 20, 22, 23).

Рис. 19. Температурная зависимость общей активности нейтральных протеаз печени сусликов после 2-го месяца спячки и дальнейшего самосогревания до 10ºС.

Рис. 20. Температурная зависимость общей активности нейтральных протеаз печени сусликов после 2-го месяца спячки и дальнейшего самосогревания до 20ºС.

Рис. 21. Температурная зависимость общей активности нейтральных протеаз печени сусликов после 2-го месяца спячки и дальнейшего самосогревания до 25ºС.

Рис. 22. Температурная зависимость общей активности нейтральных протеаз печени сусликов после 2-го месяца спячки и дальнейшего самосогревания до 30ºС.

Рис. 23. Температурная зависимость общей активности нейтральных протеаз печени сусликов после 2-го месяца спячки и дальнейшего самосогревания до 37ºС.

Кроме того, обращает на себя внимание тот факт, что характер Аррениусовских кривых у сусликов бодрствующих (лето и осень), после 3-го месяца зимней спячки (t°=5-8°С), а также при самосогревании до 20°С, 30°С и 37°С, после индуцированного пробуждения, имеет общую закономерность. После1-го и 2-го месяцев зимней спячки (когда температура тела максимально снижена до -3-4°С) и на этапах последующего самосогревания (10°С, 25°С), резко меняется характер и наклон Арениусовских кривых. Это может свидетельствовать как о конформационных изменениях в молекуле белка, так и в его микроокружении. Можно предположить, что в первом случае не изменяется характер молекул фермента, а меняется лишь их число (к 3-му месяцу их число увеличивается).