Метод основан на образовании окрашенных продуктов ароматических аминокислот (триптофан и тирозин) с реактивом Фолина в сочетании с биуретовой реакцией на пептидные связи (Lowry et al., 1951).
.4 мл исследуемого раствора смешивали с 2 мл раствора С, перемешивали и оставляли при комнатной температуре на 10 мин. Затем добавляли 0,2 мл реактива Фолина - Чокальтеу. Содержимое пробирки тщательно перемешивали и через 30 минут колориметрировали при длине волны 750 нм в кюветах с толщиной слоя жидкости 5 мм. Предварительно строили калибровочный график по стандартному раствору альбумина и по нему определяли содержание белка в опытной пробе.
.4.6 Исследование температурной зависимости активности
нейтральных протеаз
Для изучения температурной зависимости активности нейтральных протеаз пробы инкубировали при 10, 20, 30, 37 и 40ºС. Время инкубации во всех случаях составляло 60 мин. Полученные результаты представлены в Аррениусовских координатах : lg V - 1000/Т, где V - скорость реакции, Т -273+ температура инкубации.
На графиках в Аррениусовских координатах вычисляли положение точки излома и энергии активации выше и ниже излома.
Энергию активации определяли из наклона прямой по следующей формуле:
=-R∙tgα
где R - газовая постоянная,
α - угол, образуемый прямой с осью абсцисс (Мейланов, 1999).
TimeBiology